Method for identifying compounds that modulate a t2r taste receptor

Abstract

The invention provides nucleic acid and amino acid sequences for a novel family of taste transduction G-protein coupled receptors, antibodies to such receptors, methods of detecting such nucleic acids and receptors, and methods of screening for modulators of taste transduction G-protein coupled receptors.

1 - 45 . (canceled) 
     
     
         46 . An isolated nucleic acid encoding a taste transduction G-protein coupled receptor, the receptor comprising greater than 50% amino acid sequence identity to a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO:166, SEQ ID NO:167, SEQ ID NO:168, SEQ ID NO:169, SEQ ID NO:170, and SEQ ID NO:171. 
     
     
         47 . (canceled) 
     
     
         48 . The nucleic acid of  claim 46 , wherein the nucleic acid encodes a receptor that specifically binds to polyclonal antibodies generated against a polypeptide having a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO:101, SEQ ID NO:103, SEQ ID NO:105, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:111, SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:117, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:123, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:129, SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:133, SEQ ID NO:135, SEQ ID NO:137, SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:141, SEQ ID NO:143, SEQ ID-NO:145, SEQ ID NO:147, SEQ ID NO:149, SEQ ID NO:151, SEQ ID NO:153, SEQ ID NO:155, SEQ ID NO:158, SEQ ID NO:160, SEQ ID NO:162, and SEQ ID NO:164, but not to polyclonal antibodies generated against a polypeptide having a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:75, and SEQ ID NO:76. 
     
     
         49 . (canceled) 
     
     
         50 . The nucleic acid of  claim 46 , wherein the nucleic acid encodes a receptor comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:83, SEQ 113 NO:85, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:89, SEQ lD NO:91, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO:101, SEQ ID NO:103, SEQ ID NO:105, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:111, SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:117, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:123, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:129, SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:133, SEQ ID NO:135, SEQ ID NO:137, SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:141, SEQ ID NO:143, SEQ ID NO:145, SEQ ID NO:147, SEQ ID NO:149, SEQ ID NO:151, SEQ ID NO:153, SEQ ID NO:155, SEQ ID NO:158, SEQ ID NO:160, SEQ ID NO:162, and SEQ ID NO:164. 
     
     
         51 . The nucleic acid of  claim 46 , wherein the nucleic acid comprises a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:102, SEQ ID NO:104 SEQ ID NO:106, SEQ ID NO:108, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:112, SEQ ID-NO:114, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:120, SEQ ID NO:120, SEQ ID NO:122, SEQ ID NO:124, SEQ ID NO:126, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:138, SEQ ID NO:140, SEQ ID NO:142, SEQ ID NO:144, SEQ ID NO:146, SEQ ID NO:148, SEQ ID NO:150, SEQ ID NO:152, SEQ ID NO:154, SEQ ID NO:156, SEQ ID NO:157, SEQ ID NO:159, SEQ ID NO:161, SEQ ID NO:163, and SEQ ID NO:165. 
     
     
         52 . (canceled) 
     
     
         53 . The nucleic acid of  claim 46 , wherein the nucleic acid encodes a chimeric polypeptide comprising an extracellular domain or a transmembrane region linked to a heterologous polypeptide. 
     
     
         54 . An expression vector comprising the nucleic acid of  claim 46 . 
     
     
         55 . An isolated cell comprising the vector of  claim 54 . 
     
     
         56 . An isolated nucleic acid encoding a taste transduction G-protein coupled receptor; wherein the nucleic acid is amplified by primers that selectively hybridize under stringent hybridization conditions to the same sequence as degenerate primer sets encoding amino-acid sequences selected from the group consisting of: 
       
         
           
                 
                 
                 
               
                     
                 
                     
                   (1) 
                   E(F/A)(I/V/L)(V/L)G(I/V)(L/V)GN(G/T) 
                 
                     
                     
                   FI(V/A)LVNC(I/M)DW (SEQ ID NO: 166); 
                 
                     
                 
                     
                   (2) 
                   (D/G)(F/L)([[1]]L)L(T/I)(G/A/S)LAISR 
                 
                     
                     
                   I(C/G/F)L (SEQ ID NO: 167); 
                 
                     
                 
                     
                   (3) 
                   NH(L/F)(S/T/N)(L/I/V)W(F/L)(A/T)T(C/ 
                 
                     
                     
                   S/N)L(S/N/G)(I/V) (SEQ ID NO: 168); 
                 
                     
                 
                     
                   (4) 
                   FY(F/C)LKIA(N/S)FS(H/N)(P/S)(L/I/V)F 
                 
                     
                     
                   L(W/Y)LK (SEQ ID NO: 169); 
                 
                     
                 
                     
                   (5) 
                   LLI(I/F/V)SLW(K/R)H(S/T)(K/R)(Q/K) 
                 
                     
                     
                   (M/[[1]]I)(Q/K) (SEQ ID NO: 170);  
                 
                     
                     
                   and 
                 
                     
                 
                     
                   (6) 
                   HS(F/L)(I/V)LI(L/M)(G/S/T)N(P/S/N)KL 
                 
                     
                     
                   (K/R)(Q/R) (SEQ ID NO: 171). 
                 
                     
                 
             
                
               
               
                
                
                
                
                
                
                
                
                
                
                
                
                
                
                
                
                
                
                
               
            
           
         
       
     
     
         57 . The nucleic acid of  claim 56 , wherein the receptor comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO:166, SEQ ID NO:167, SEQ ID NO:168, SEQ ID NO:169, SEQ ID NO:170, and SEQ ID NO:171. 
     
     
         58 . The nucleic acid of  claim 56 , wherein the nucleic acid encodes a receptor that specifically binds to polyclonal antibodies generated against a polypeptide having a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO:101, SEQ ID NO:103, SEQ ID NO:105, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:111, SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:117, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:123, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:129, SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:133, SEQ ID NO:135, SEQ ID NO:137, SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:141, SEQ ID NO:143, SEQ ID NO:145, SEQ ID NO:147, SEQ ID NO:149, SEQ ID NO:151, SEQ ID NO:153, SEQ ID NO:155, SEQ ID NO:158, SEQ ID NO:160, SEQ ID NO:162, and SEQ ID NO:164, but not to polyclonal antibodies generated against a polypeptide having a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:70, SEQ ID.NO:71, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:75, and SEQ ID NO:76. 
     
     
         59 . (canceled) 
     
     
         60 . The nucleic acid of  claim 56 , wherein the nucleic acid encodes a receptor comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO:101, SEQ ID NO:103, SEQ ID NO:105, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:111, SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:117, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:123, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:129, SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:133, SEQ ID NO:135, SEQ ID NO:137, SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:141, SEQ ID NO:143, SEQ ID NO:145, SEQ ID NO:147, SEQ ID NO:149, SEQ ID NO:151, SEQ ID NO:153, SEQ ID NO:155, SEQ ID NO:158, SEQ ID NO:160, SEQ ID NO:162, and SEQ ID NO:164. 
     
     
         61 - 62 . (canceled) 
     
     
         63 . The nucleic acid of  claim 56 , wherein the nucleic acid encodes a chimeric polypeptide comprising an extracellular domain or a transmembrane region linked to a heterologous polypeptide. 
     
     
         64 . An expression vector comprising the nucleic acid of  claim 56 . 
     
     
         65 . An isolated cell comprising the vector of  claim 64 . 
     
     
         66 . An isolated nucleic acid encoding a taste transduction G-protein coupled receptor, the receptor comprising greater than 60% amino acid sequence identity to a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO:101, SEQ ID NO:103, SEQ ID NO:105, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:111, SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:117, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:123, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:129, SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:133, SEQ ID NO:135, SEQ ID NO:137, SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:141, SEQ ID NO:143, SEQ ID NO:145, SEQ ID NO:147, SEQ ID NO:149, SEQ ID NO:151, SEQ ID NO:153, SEQ ID NO:155, SEQ ID NO:158, SEQ ID NO:160, SEQ ID NO:162, and SEQ ID NO:164. 
     
     
         67 . The nucleic acid of  claim 66 , wherein the nucleic acid encodes a receptor that specifically binds to polyclonal antibodies generated against a polypeptide having a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO:101, SEQ ID NO:103, SEQ ID NO:105, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:111, SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:117, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:123, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:129, SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:133, SEQ ID NO:135, SEQ ID NO:137, SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:141, SEQ ID NO:143, SEQ ID NO:145, SEQ ID NO:147, SEQ ID NO:149, SEQ ID NO:151, SEQ ID NO:153, SEQ ID NO:155, SEQ ID NO:158, SEQ ID NO:160, SEQ ID NO:162, and SEQ ID NO:164, but not to polyclonal antibodies generated against a polypeptide having a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ IID NO:37, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49, SEQ NO:50, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:56, SEQID NO:58, SEQ 1D NO:59, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:75, and SEQ ID NO:76. 
     
     
         68 . (canceled) 
     
     
         69 . The nucleic acid of  claim 66 , wherein the nucleic acid encodes a receptor comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO:101, SEQ ID NO:103, SEQ ID NO:105, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:111, SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:117, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:123, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:129, SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:133, SEQ ID NO:135, SEQ ID NO:137, SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:141, SEQ ID NO:143, SEQ ID NO:145, SEQ ID NO:147, SEQ ID NO:149, SEQ ID NO:151, SEQ ID NO:153, SEQ ID NO:155, SEQ ID NO:158, SEQ ID NO:160, SEQ ID NO:162, and SEQ ID NO:164. 
     
     
         70 - 71 . (canceled) 
     
     
         72 . The nucleic acid of  claim 66 , wherein the nucleic acid encodes a chimeric polypeptide comprising an extracellular domain or transmembrane region linked to a heterologous polypeptide. 
     
     
         73 . An expression vector comprising the nucleic acid of  claim 66 . 
     
     
         74 . An isolated cell comprising the vector of  claim 73 . 
     
     
         75 - 93 . (canceled)